??產(chǎn)品基礎(chǔ)信息  

- 貨號：BCHM-ASY-0005  

- 品名：LCGreen Plus Kits 熒光染料

- 品牌：BioFireDefense  

- 規(guī)格：1000 Reactions

- 應(yīng)用領(lǐng)域：高分辨率熔解曲線分析（HRM）、基因分型、突變檢測、甲基化研究  

??詳細介紹  

- 技術(shù)原理  

LCGreen Plus Kits 熒光染料是一種DNA雙鏈飽和熒光染料，通過實時監(jiān)測PCR產(chǎn)物熔解過程中熒光強度的變化，精準識別DNA序列的微小差異（如單堿基突變、SNP、插入/缺失等）。其化學結(jié)構(gòu)在高溫變性時不會遷移至解鏈DNA區(qū)域，確保熔解曲線分辨率高達0.1°C。  

- 核心應(yīng)用  

1. 基因分型：區(qū)分雜合子與純合子突變（如CFTR基因突變篩查）。  

2. 病原體鑒定：快速檢測細菌/病毒耐藥基因變異（如結(jié)核分枝桿菌）。  

3. 甲基化分析：定量評估DNA甲基化水平（如癌癥相關(guān)基因啟動子甲基化）。  

4. 質(zhì)量控制：驗證PCR擴增產(chǎn)物特異性，避免非特異性擴增干擾。  

- 性能參數(shù)  

1.靈敏度：可檢測低至0.1%的突變等位基因。  

2.兼容性：支持Roche LightCycler、Applied Biosystems等主流HRM儀器。  

3.安全性：無毒性、無致癌性，符合生物安全標準。  

??核心優(yōu)勢  

1. 超高分辨率  

  - 區(qū)分單堿基差異（如A/T或C/G突變），熔解曲線峰形差異顯著。  

  - 支持400bp以內(nèi)短片段分析，適合高密度位點篩查。  

2. 閉管操作，0污染

  - 無需開蓋加探針，降低交叉污染風險，適合臨床樣本檢測。  

3. 成本效益高  

  - 無需定制探針，直接替代傳統(tǒng)TaqMan探針法，節(jié)省50%以上成本。  

4. 快速實驗流程  

  - 全程僅需15分鐘（傳統(tǒng)方法需2小時），支持高通量樣本處理。  

5. 數(shù)據(jù)穩(wěn)定性強  

  - 高信噪比（SNR>30），重復(fù)性CV值<2%，確保結(jié)果可靠。  

?常見問題解答  

Q1：LCGreen Plus是否適用于所有HRM儀器？  

A：兼容主流設(shè)備（如Roche LightCycler 480、Qiagen Rotor-Gene），但需驗證儀器熱均一性。  

Q2：能否檢測甲基化程度？  

A：支持！通過MS-HRM（甲基化敏感性HRM）技術(shù)，可定量分析甲基化水平（如MGMT基因啟動子）。  

Q3：樣本類型有哪些限制？  

A：適用于DNA樣本（純度OD260/280=1.8-2.0），RNA需先反轉(zhuǎn)錄為cDNA。  

Q4：如何保存與使用？  

A：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。推薦工作濃度為0.2-0.4μM。  

Q5：結(jié)果如何解讀？  

A：通過HRM分析軟件（如LightCycler® 480 Gene Scanning Software）生成差異圖，對比標準品判斷突變類型。  

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