abraxis 520011說明書

Microcystins/Nodularins (ADDA) (EPA ETV) (EPA Method 546), ELISA, 96-test

微囊藻毒素/結(jié)核

菌素（ADDA）（EPA ETV）（EPA方法546），ELISA，96試驗

微囊藻毒素-ADDA ELISA是一種用于定量檢測水樣中微囊藻毒素和結(jié)節(jié)蛋白的靈敏性的免疫測定方法。

該測試適用于定量和/或定性檢測水樣中的微囊藻毒素和結(jié)核菌素[請參考適當(dāng)?shù)募夹g(shù)公告，以收集，處理和處理飲用水（處理過的和未經(jīng)處理的）和休閑用水樣品。如有必要，可以通過HPLC，蛋白磷酸酶測定或其他常規(guī)方法確認(rèn)陽性樣品。該測試是一種間接競爭性ELISA，用于微囊藻毒素和Nodularins的同源基因獨立檢測。它基于對微囊藻毒素，結(jié)節(jié)蛋白及其同系物的特異性抗體識別。當(dāng)樣品中存在毒素時，毒素和固定在板上的微囊藻毒素-蛋白質(zhì)類似物競爭溶液中抗微囊藻毒素/結(jié)節(jié)菌素抗體的結(jié)合位點。然后洗滌板，并添加第二抗體-HRP標(biāo)記。在第二洗滌步驟和加入底物溶液之后，產(chǎn)生顏色信號。藍(lán)色的強(qiáng)度與樣品中微囊藻毒素的濃度成反比。在時間后停止顯色反應(yīng)，并使用ELISA讀數(shù)器評估顏色。使用每次運行構(gòu)建的標(biāo)準(zhǔn)曲線通過內(nèi)插法確定樣品的濃度。

編號520011

格式：96孔板ELISA

微咸水或海水中的微囊藻毒素樣品制備

1. 預(yù)期用途

用于制備用于 Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 分析的微咸水或海水樣品。

2. 靈敏度

在微咸水或海水中為 0.263 ppb

3. 材料和試劑提供一次性 5¾”玻璃巴斯德吸管一次性 9”玻璃巴斯德吸管玻璃棉

巴斯德吸管燈泡

微囊藻毒素-ADDA 海水樣品處理液微囊藻毒素-ADDA 海水樣品凈化樹脂

4. 所需的其他材料（未提供）

12 x 75 mm 試管

20 mL 玻璃小瓶，帶有聚四氟乙烯內(nèi)襯蓋，去離子水或蒸餾水

帶特氟龍內(nèi)襯蓋的 4 mL 玻璃小瓶 Scoopula

帶一次性塑料槍頭的微量移液器渦旋混合器

Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 試劑盒

5. 注釋和注意事項

本程序預(yù)期用于微咸水或海水樣品。其他基質(zhì)在用于本程序前應(yīng)進(jìn)行*驗證。

6. 色譜柱制備程序

6.1 將少量玻璃棉放入 5¾”玻璃巴斯德吸管頂部。使用 9" 玻璃巴斯德移液器，將玻璃棉推入 5¾" 移液器底部，形成色譜柱底部。玻璃棉的深度應(yīng)約為 5 mm。將色譜柱置于 12 x 75 mm 試管中。

6.2 每個色譜柱將需要約 1.5 g 海水樣品清除樹脂。計算微囊藻毒素-ADDA 海水樣品凈化樹脂的適量并加至 20 mL 玻璃瓶中。

6.3 以約 2:1 的比例向微囊藻毒素-ADDA 海水樣品清除樹脂中加入蒸餾水或去離子水（例如，每 5 g 樹脂中加入 10 mL 去離子水或蒸餾水）。搖動或投票。

6.4 使用 9" 巴斯德吸管將樹脂水溶液移取至色譜柱中。將移液器吸頭保持在柱床表面，避免在柱床中形成氣泡。在距離移液器頂部約 2 cm 處，將色譜柱填充至壓痕處。這將產(chǎn)生一個約 8 cm 的色譜柱。

6.5 使去離子水或蒸餾水從色譜柱中排出。  在管中水面以上至少 1 cm 處提起色譜柱。將移液器燈泡靠在色譜柱頂部（不要將燈泡連接到色譜柱上），將剩余的水推出色譜柱。避免

使色譜柱的頭端與管中的水接觸，以防止水吸入回色譜柱中。

6.6 將色譜柱置于適當(dāng)標(biāo)記的 4 mL 玻璃瓶中。

7. 樣品清理

7.1 向潔凈、適當(dāng)標(biāo)記的 4 mL 玻璃瓶中加入 1 mL 微咸水或海水樣品。加入 50µL 微囊藻毒素-ADDA 海水樣品處理溶液。渦旋。

7.2 向色譜柱頂部加入 375 μL 經(jīng)處理的微咸水或海水樣品。使樣品流過色譜柱并收集在小瓶中。

7.3 向色譜柱中再加入一份 375 μL 經(jīng)處理樣本。流過色譜柱。

7.4 在小瓶中樣品表面上方至少 1 cm 處提起色譜柱。將移液器燈泡靠在色譜柱頂部（不要將燈泡連接到色譜柱上），將剩余樣品推出色譜柱。避免色譜柱與小瓶中的樣品接觸，以防止樣品被抽吸回色譜柱中。

7.5 將色譜柱放回小瓶中。向色譜柱頂部加入 500 μL 蒸餾水或去離子水。使沖洗液流過色譜柱，并與樣品一起收集。

7.6 將色譜柱頂端抬高至樣品表面上方至少 1 cm 處/小瓶中沖洗液中。將移液器燈泡靠在色譜柱頂部（不要將燈泡連接到色譜柱上），將剩余的沖洗液推出色譜柱。避免色譜柱與小瓶中的樣品接觸，以防止樣品被抽吸回色譜柱中。

7.7 取出色譜柱并丟棄（色譜柱僅供一次性使用）。蓋上小瓶并渦旋。然后可以使用 Abraxis 微囊藻毒素-ADDA ELISA 試劑盒分析樣品。

8. 結(jié)果評價

將 ELISA 結(jié)果乘以因子 1.75，測定樣品中微囊藻毒素的濃度。濃度低于標(biāo)準(zhǔn)品 1 (0.15 ppb) 的樣品應(yīng)報告為含有 < 0.263 ppb 的微囊藻毒素。濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品 5 (5.0 ppb) 的樣品可報告為含有

> 8.75 ppb 微囊藻毒素或進(jìn)一步稀釋并重新分析以獲得準(zhǔn)確的定量結(jié)果。

9. 性能數(shù)據(jù)

恢復(fù)

用如上所述制備的微囊藻毒素-LR、微囊藻毒素-LA 或微囊藻毒素-RR 加標(biāo)含不同濃度海水的樣品，然后使用微囊藻毒素-ADDA 試驗進(jìn)行分析。微囊藻毒素-LR 的平均回收率為 91.7%。Microcystin-LA 的平均回收率為 92.1%。微囊藻毒素-RR 的平均回收率為 98.9%。